⊙ 相差顯微鏡的原理

　　◎ 光波有振幅(亮度)、波長(顏色)及相位(指在某一時間上光的波動所能達到的位置)的不同。

　　◎ 當光通過物體時，如波長和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標本的道理。而活細胞和未經(jīng)染色的生物標本，因細胞各部微細結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過時，波長和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化(相應(yīng)發(fā)生的差異即相位差)，而這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。

　　◎ 相差顯微鏡能夠改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相位差變成振幅差(明暗差)，同時它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細胞或未染色標本。

　　⊙結(jié)構(gòu)特點

　　◎ 相差顯微鏡與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相位板的物鏡(通常標有PH的標記)代替普通物鏡，并帶有一個合軸調(diào)節(jié)用的望遠鏡。

　　◎ 環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。

　　◎ 相位板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。

　　◎ 調(diào)軸望遠鏡是用來進行合鈾調(diào)節(jié)的。相差顯微鏡在使用時，聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上，必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合(共軛重合)，才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。

　　⊙相差附件

　　⊙使用方法

　　(1)相差裝置的調(diào)換安裝

　　卸下普通顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍色光，使波長范圍小的單色光線進行照明，并有吸熱作用，能使相差觀察獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。

　　(2)調(diào)焦

　　打開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將“0”對準標示孔，使普通聚光器部分進入光路。先使用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進行對光和調(diào)焦。 旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)，如相差物鏡為40X時應(yīng)用40X標示孔的光闌。

　　(3)合鈾調(diào)整

　　拔出目鏡，插入合鈾望遠鏡，一邊從望遠鏡向內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒;一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠鏡內(nèi)筒使其上升，當對準焦點就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)，此時可將望遠鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與暗環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合。

　　(4)觀察

　　換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌。

　　⊙相差調(diào)節(jié)

　　⊙用途

　　用于觀察組織培養(yǎng)中活細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。活細胞無色透明，一般光鏡下不易分辨細胞輪廓及其結(jié)構(gòu)，組織培養(yǎng)研究常用的是倒置相差顯微鏡。

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